蛋白质是生命活动最重要的物质基础之一，在宠物营养中占有特殊的地位，其发挥的重要生理作用是其他营养物质不可代替的。饲料产品中蛋白质的含量是评价饲料营养价值和确定饲料等级的重要指标之一，对该项指标进行定量测定是饲料品质分析中的重要内容。目前，饲料检测工作中常用的蛋白质检测方法包括凯氏定氮法、杜马斯燃烧法、近红外光谱法、纳氏比色法、双缩脲法、原子荧光分光光度计法等。

  1凯氏定氮法

  凯氏定氮法是测定化合物中蛋白质的经典方法，分为常量蒸馏法和半微量蒸馏法，其原理是先将样品在混合催化剂(硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠)的作用下，用浓硫酸消化样品，使含氮物转化成硫酸铵，在碱性条件下将铵盐转化为氨进而蒸馏出来，用过量的硼酸吸收并结合成硼酸铵，然后以甲基红和溴甲酚绿作为混合指示剂，再用盐酸标准溶液滴定，进而测定氮的含量，最后将结果乘以换算系数，从而计算出样品中粗蛋白质的含量。该方法的操作步骤较为复杂，分析测定过程中易受多种因素的干扰，这些因素对测定结果的准确性均产生影响。

  有学者对凯氏定氮法的注意事项和操作要点进行了探讨。李萍对利用凯氏定氮法测定饲料中粗蛋白质过程中的消化﹑蒸馏、滴定步骤的注意事项进行了阐述;温铁岩等出了采用凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的操作要点;范桂芝结合多年的实际工作经验，总结了饲料中粗蛋白质检测操作技术要点，提出了饲料中粗蛋白质的测定应注意样品称取、试样液消化、蒸馏、滴定4个关键环节。

  2杜马斯燃烧定氮法

  该方法是将样品在燃烧管中进行燃烧处理(一般为800~1 200 ℃)，而后经过一系列的反应，包括氧化、还原、吸收干扰气体和盐类等过程，样品中的含氮物质被定量转化成分子氮，通过热导检测仪检测，得到饲料样品中的氮含量，然后乘以换算系数，从而得到蛋白质的含量。

  该方法的优点是检测速度快、效率高，但由于杜马斯定氮仪价格昂贵，导致单次检测成本较高，不适合少量样品的测定，同时，由于取样量较少，不适合蛋白质浓度低的样品的测定。樊霞等分别采用杜马斯燃烧法和凯氏定氮法对10类植物源性饲料原料进行了粗蛋白质含量的测定，并对2种方法测定的粗蛋白质含量结果进行了比较分析，结果表明，除玉米蛋白粉以外，其他植物源性饲料原料的测定结果均不存在显著性差异。

  3近红外光谱法

  近红外光谱分析技术是20世纪70年代兴起的一种物质成分分析技术。近红外光谱的波长范围是780~2500 nm，通常分为近红外短波区(780~1100 nm)和近红外长波区(1100~2 500 nm)。一般情况下，近红外光谱源于有机物中含氢基团，如OH、CH、NH、SH、PH等振动光谱的倍频及合频吸收，以漫反射方式获得在近红外区的吸收光谱，通过主成分分析、偏最小二乘法、人工神经网等化学计量学的手段，构建物质光谱与待测成分含量之间的线性或非线性模型，从而实现利用物质的近红外光谱信息对待测成分含量的快速计算。

  近红外光谱法的优点有简便、快速、高效、环保，但该方法也存在其固有的缺点：①由于测定的是倍频及合频吸收，因此灵敏度较差，一般要求检测样品中的蛋白质含量>1%;②建模难度较大，定标模型的适用范围、基础数据的准确性，即选择计量学方法的合理性，都将直接影响最终的分析结果。

  熊罗英等利用近红外光谱法对猪料、虾料、膨化料3种经不同工艺制成的颗粒料进行水分和粗蛋白质含量预测效果的研究，并分析不同加工工艺对该方法应用效果的影响。结果表明，近红外光谱法能够准确地预测3种饲料的水分和粗蛋白质含量，其中，猪料的水分定标模型效果最好，虾料次之，最后是膨化料;虾料的粗蛋白质定标模型效果最好，膨化料次之，猪料略差。

  4纳氏比色法

  该方法首先采用凯氏定氮法中的消化步骤对样品进行消化，然后利用氯化铵作为基准物，将得到的消化液稀释到一定浓度后加入纳氏试剂进行比色，利用氨态氮含量计算出饲料中粗蛋白质的含量。

  纳氏比色法的操作步骤较凯氏定氮法更为简练。魏金涛等对纳氏比色法和半微量凯氏定氮法测定饲料中粗蛋白质含量的应用效果进行了比较，结果表明，二者的测定结果差异不显著，且纳氏试剂的最佳添加量为1.5 mL，最佳显色时间为10 min。周东凯等采用凯氏定氮法和纳氏比色法对干酪素的含量进行测定，结果表明，凯氏定氮法与纳氏比色法的测定结果平均值相对偏差仅为1.38%，在玉米秸秤中测定粗蛋白含量的最大相对偏差为2.94% ，均在允许范围内。

  5双缩脲法

  饲料中的蛋白质由多种氨基酸组成，各种氨基酸的氨基与羧基相互作用，形成可与双缩脲反应的-CO-NH-基团。在碱性条件下，该基团能与硫酸铜作用，铜离子与肽键相配位形成一种含铜的环状复合物，呈紫红色。该化合物在540 nm处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关，因此，将饲料样品用碱性溶液处理后，与双缩脲试剂反应，测定反应液的吸光度值，然后在标准曲线上查出对应的蛋白质浓度值，即可得到样品中蛋白质的含量。

  张厚锋等比较了双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的应用效果，结果表明，2种方法的测定结果差异较大，双缩脲法的测定结果比凯氏定氮法小17.3% ，而且结果不稳定，不适用于饲料(配合、浓缩)蛋白质含量的测定;利用双缩脲法测定牛奶、豆汁、牛血清蛋白质含量与凯氏定氮法的测定结果较为接近，因为这些样品中所含蛋白质溶解度较大，所含蛋白质种类相对较少，其性质与标准蛋白液接近。陈革对改良的双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的应用效果进行了比较，结果表明，二者检测结果差异不显著，其认为改良双缩脲法具有快速、准确、稳定等优点，具有一定的推广价值。

  6原子荧光分光光度计法

  该方法的检测原理为：将样品消化液与浓碱混合，反应后产生的氨通过载气带出，经气体吸收池吸收，以砷空心阴极灯为光源，通过测定其透光强度而测定出氮的质量分数。该方法具有自动化程度高等特点，适用于批量分析。姜能座等应用原子荧光分光光度计法对绿藻精粉等饲料原料中的蛋白质含量进行了测定，并将其测定结果与国家标准(GB/T14771—1993)推荐方法的测定结果进行了比较，发现2种分析方法的测定结果具有很好的一致性。